Gabinety Stomatologiczne
Zdrowe zeby oraz ich leczenie

Dysfunkcja spinowo-móżdżkowa u dorosłych wywołana mutacją w genie dla białka przenoszącego -tokoferol czesc 4

Posted in Uncategorized  by admin
December 4th, 2018

Panel C pokazuje częściowe sekwencje aminokwasowe normalnego i zmutowanego ludzkiego .-TTP. Reszta guaniny w genie pacjenta zastępująca tyminę dzikiego typu jest oznaczona gwiazdką. Struktura ludzkiego genu .-TTP została częściowo wyjaśniona. Poprzez bezpośrednie sekwencjonowanie fragmentów amplifikowanych przez PCR, określiliśmy genomową sekwencję DNA kodującą ponad 95 procent aminokwasów .-TTP. Znaleźliśmy zmianę pojedynczego nukleotydu w drugim z pięciu egzonów kodujących (Figura 1A, Figura 1B i Figura 1C). Wyniki wykazały, że pacjent był homozygotyczny pod względem transwersji tyminy-toguaniny (T-to-G) przy nukleotydie 303 cDNA25 .-TTP, który zastępuje histydynę (CAT) glutaminą (CAG) w pozycji 101.
Analiza funkcjonalna zmutowanego .-TTP
Ryc. 2. Ryc. 2. Wpływ mutacji His101Gln na ekspresję .-TTP w komórkach COS-7. Panel A pokazuje reprezentatywny wynik analizy immunoblot. Komórki COS-7 transfekowano samym pRc / CMV (Mock), pRc / CMV niosącym normalny ludzki cDNA .-TTP (normalny) lub pRc / CMV niosącym zmutowany cDNA .-TTP z mutacją His101Gln (Mutant). Panel B pokazuje aktywności .-TTP w transfekowanych komórkach. Aktywności transferowe mierzono w supernatantach komórek poddanych działaniu ultradźwięków po odwirowaniu przy 100 000 x g przez jedną godzinę w trzech powtórzeniach dla każdego transfektanta. Aktywność wyrażono jako procent .-tokoferolu przeniesionego z liposomu (pęcherzyk donorowy) do frakcji ciężkiej błony (pęcherzyk akceptorowy). Paski przedstawiają średnie (. SD) wyniki trzech niezależnych eksperymentów.
Aby zbadać funkcjonalne znaczenie mutacji His101Gln, plazmidy ekspresyjne transfekowano do komórek COS-7, a supernatanty komórkowe badano pod kątem zarówno masy, jak i aktywności .-TTP. Analiza immunoblot wykazała, że komórki wyrażające normalny lub zmutowany cDNA wytwarzały podobne ilości .-TTP o przybliżonej masie cząsteczkowej 30 000 (Figura 2A). Przeciwnie, produkty różniły się istotnie pod względem aktywności biologicznej, mierzonej jako stosunek aktywności przenoszenia .-tokoferolu in vitro (Figura 2B). Po uwzględnieniu poziomów tła w pozorowanej transfekcji, jak również małych zmierzonych różnic wyrażonych w masie białka, średnia (. SD) aktywność zmutowanej .-TTP wynosiła 11,4 . 2,2% aktywności dzikiego wirusa -type .-TTP. Wyniki te wskazują, że mutacja His101Gln prowadzi do wytworzenia funkcjonalnie wadliwego .-TTP.
Częstość występowania mutacji His101Gln wśród mieszkańców rodzimej wyspy pacjenta
Ryc. 3. Ryc. 3. Wykrywanie mutacji His101Gln genu .-TTP przez trawienie enzymem restrykcyjnym Ncol. Panel A pokazuje wzmocnioną część ludzkiego genu .-TTP. Fragment DNA o 158 parach zasad (bp) powielono przez PCR ze starterami A i B. Wskazano położenie miejsca NcoI zniesione przez mutację His101Gln. W panelu B, elektroforeza trawionych produktów na 1,5% żelu agarozowym pokazuje osobnika homozygotycznego (pacjenta wskaźnikowego) i dwóch heterozygotycznych osobników. Znacznik wielkości molekularnej wynosił .x174 / HaeIII.
Izolowana lokalizacja ojczyzny pacjenta w połączeniu z brakiem rodzinnej historii pokrewieństwa doprowadziła nas do hipotezy, że mutacja His101Gln była stosunkowo powszechna wśród mieszkańców wyspy.
[przypisy: usg jamy brzusznej bielsko, oczopląs pionowy, lisinoratio ]

Tags: , ,

Leave a Reply

Powiązane tematy z artykułem: lisinoratio oczopląs pionowy usg jamy brzusznej bielsko